项目摘要
中文摘要
eb病毒致人b淋巴细胞永生化的机制是一个具有重要生物学意义而亟待解决的难题,由于多种细胞内分子及病毒成分参与该永生化过程,故而常规的针对一种或少数几种基因或蛋白质分子的实验方法在研究此课题时受到明显的限制。本项目在已建立的eb病毒相关永生化细胞系及已取得的相关研究成果基础上,拟运用高灵敏度的胶内差异凝胶电泳(dige)和串联质谱(tof-tof)等技术,高通量的从蛋白质组水平分析eb病毒感染转化的人外周血b淋巴细胞在永生化过程的不同时期的蛋白质表达谱差异;进而从差异蛋白质中寻找并鉴定在永生化过程中发挥调节作用的蛋白质,再结合经典的分子生物学技术以及rna干扰技术从基因水平研究这些功能蛋白质的作用机制,为阐明eb病毒致人b细胞永生化的机理提供更充分的科学依据。本项目研究将通过新技术从一个新的层面对ebv致瘤机制、细胞衰老机制等研究产生推动作用。
结题摘要
eb病毒致人b淋巴细胞永生化的机制是一个具有重要生物学意义而亟待解决的难题,由于多种细胞内分子及病毒成分参与该永生化过程,故而常规的针对一种或少数几种基因或蛋白质分子的实验方法在研究此课题时受到明显的限制。本项目运用胶内差异凝胶电泳(dige)技术,高通量的从蛋白质组水平分析eb病毒感染转化的人外周血b淋巴细胞在永生化过程的不同时期的蛋白质表达谱差异;进而从差异蛋白质中寻找并鉴定在永生化过程中发挥调节作用的蛋白质。通过实验研究发现了stathmin 1、p2y等可能参与永生化过程的蛋白质因子;经过经典的分子生物学技术以及rna干扰技术从基因水平研究这些功能蛋白质的作用机制,发现其在多种细胞的增殖分化过程中具有较为重要的作用,stathmin 1等基因的异常表达可以改变细胞的增殖状况。本研究运用新技术从蛋白质组学的角度探讨了细胞永生化这一复杂的生物学现象的可能机理,先从层面最本质的功能学层面进行研究,圈定目标范围以后用经典分子生物学手段对ebv致瘤机制、细胞衰老机制等进行研究。研究结果为阐明eb病毒致人b细胞永生化的机理提供更充分的实验数据支持,为下一步深入研究奠定基础。